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en génétique la ADN complémentaire (abrégé ADNc) Il est ADN double hélice synthétisé à partir d'un échantillon de ARN messager mature.

cDNA Synthesis

Pour produire l'ADNc est synthétisé les deux hélices en deux étapes: la première hélice est produit en utilisant l'ARNm comme matrice, tandis que le second est synthétisé à partir de la première hélice produite.

Synthèse de moule de l'hélice

Par moule de synthèse de l'hélice, complémentaire de la séquence d'ARNm, on commence à partir du brin d'ARNm, générant son ADN complémentaire par appariement nucléobases ARN (A, U, G, C) complémentaires de celles de l'ADN (T, A, C, G, respectivement).

  • Marche à suivre:
  1. une cellule eucaryote transcrit l'ADN en ARN (pré-ARNm);
  2. la même cellule processus les filaments de pré-ARNm élimine introns, en ajoutant une extrémité poly-A et capot 5 ' (Également appelé ARN capot 7-metilguanosina, l'ARN7G ou CAP5 « );
  3. les ARNm matures sont extraits de la cellule;
  4. ARNm est mis en solution en contact avec un oligonucléotide apprêt poly-T, qui hybride avec la queue poly-A de l'ARNm.
  5. la transcriptase inverse Il reconnaît l'amorce et initie la production de l'ADNc, en présence de désoxynucléotides nécessaires à l'allongement (sans la présence de l'amorce, l'enzyme ne fonctionne pas).

codage de synthèse de l'hélice

Le codage de synthèse de l'hélice se fait de la même manière que le réplication hélice en retard ou en retard brin et utilise trois enzymes: ADN polymérase de E. coli RNase H et ADN ligase

  • Marche à suivre:
  1. RNase H reconnaît les dimères ADN-ARN et dégrade l'ARNm ne laissant que quelques fragments;
  2. de courts fragments d'ARN servent d'amorces pour l'ADN polymérase qui copie la hélice complémentaire;
  3. l'activité d'exonucléase de l'enzyme provoque l'amorce d'ARN d'être dégradé et remplacé par de l'ADN;
  4. ADN ligase unit les fragments, générant l'hélice complète.

applications

Après avoir obtenu à partir de la transcription inverse de l'ARNm qui a déjà subi le processus de épissage, l'ADNc non présent les séquences introniques non-codage, ce qui permet son expression dans les systèmes procaryotes, pas autrement être en mesure de les éliminer pendant le traitement. Pour cette fonction, dans la technique génie génétique, lorsque vous souhaitez obtenir la synthèse des protéines eucaryotes dans les systèmes procaryotes, ils sont introduits dans l'hôte transporteurs expression contenant les séquences d'ADNc du gène d'intérêt, et non dans l'ADN génomique correspondant. L'avantage de cette méthode est pas toujours applicable, est la possibilité d'exploiter la vitesse et la rentabilité des cultures bactériennes pour obtenir la synthèse des protéines d'organismes eucaryotes plus complexes en grandes quantités.

L'ADNc est également utilisé dans la création de banques d'ADNc et d'expression, et pour la production de sondes utilisées dans les expériences hybridation et blot. des séquences d'ADNc partielles sont également utilisés comme EST (Marqueur de séquence exprimée) en microréseau.

rétrovirus

L'ADNc est une étape nécessaire à la réplication du patrimoine génétique de rétrovirus, ou des virus à ARN qui utilisent une transcriptase inverse pour le convertir en ADN et permettent leur intégration dans le génome de la cellule hôte.

Articles connexes

  • intron
  • Splicing
  • la synthèse des protéines
  • expressed sequence tags

liens externes

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